厭氧培養(yǎng)箱亦稱厭氧工作站或厭氧手套箱。厭氧培養(yǎng)箱是一種在無氧環(huán)境條件下進行細菌培養(yǎng)及操作的裝置。它能提供嚴格的厭氧狀態(tài)恒定的溫度培養(yǎng)條件和具有一個系統(tǒng)化、科學化的工作區(qū)域。
一、操作室厭氧環(huán)境形成
1 按使用要求放置好必要的配件和器具,并向操作室內放入二個無毒塑料袋。
2 通電源開照明燈,開控溫儀,調節(jié)所需溫度及安全溫度。
3 操作室內放入1000g鈀粒(封閉)和500g干燥劑,并放入美蘭指示劑(封閉)。
4 關緊取樣室內外門,并抽真空校驗。
5 操作室內*次置換(氮氣置換):
(1)先用橡皮管插入操作室內進氣口,另一頭插入塑料袋。
(2)接通氮氣進氣路,打開氮氣控制閥,使二只塑料袋充足氮氣,然后扎緊袋口。
(3)把乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊。
(4)把塑料袋內氮氣漸漸地放于操作室內,全部放出。
6 操作室第二次置換(氮氣置換)重復一 次充氮過程,并注意隨時用腳踏開關開閉排氣。
7 操作室第三次置換(混合氣體置換):
(混合氣體配比為:N2↑ 85% H2 ↑ 10% CO2↑ 5%)
(1)調換氣路打開混合氣道通閥門進氣,充氣時要隨時腳踏開關開閉排氣。
(2)混合氣充滿塑料袋后,關掉混合氣直通閥(三通閥),使混合氣經過流量計輸入操作并調整流量計,流量為每分鐘10毫升左右。
(3)把塑料袋內混合氣漸漸排于操作室內。
(4)通過三次換氣后,操作室內氣體含氧量已處于極微量狀態(tài)。
8 操作室內打開鈀粒除氧劑,接通除氧催化器電源進行催化除氧,一 小時后打開美蘭指示劑(美蘭安瓶)觀察其變色情況,不變色為操作室內達到厭氧環(huán)境。
9 開紫外線滅菌燈,室內進行滅菌處理。滅菌時間自定。
二、菌種的置入和培養(yǎng)
1 檢查取樣室內門并關緊之。
2 打開取樣室外門,將菌種放入取樣室后即關上外門。
3 取樣室充氮置換三次過程:先抽真空度500毫米汞柱(66Kpa)以上停,然后人工打開氮氣閥門進氣,使指針回復零位后進行下次操作。
4 如選定真空度較低就需要增加置換的次數(shù)。
5 取樣室內外門開啟,關緊要抽低真空度100毫米汞柱(13 Kpa)檢驗及幫助操作。
6 厭氧培養(yǎng)箱需要長期連續(xù)使用的條件:
(1)每天在操作室內打開美蘭指示劑觀察,正常情況下使用。如不正常就必須重新?lián)Q氣。
(2)要長期連續(xù)輸入微量的混合氣體,使補進的氫氣能和微量的氧結合通過催化吸收,保證了室內厭氧狀態(tài),補入混合氣流量選定為每分鐘10毫升左右。
(3)連續(xù)培養(yǎng)運行一 天,更換一 次除氧劑和干燥劑。
7 接種棒滅菌器的應用:
(1)隨時用鎳鉻電熱絲使電極短路而變赤熱以進行殺菌(接種棒)
(2)熔蠟處可直接放上,試管封蠟口旋轉熔蠟。
8 操作室里的培養(yǎng)箱內的溫度可任意選擇和控制。
9 混合氣瓶、氮氣瓶輸出壓力調整:調節(jié)減壓閥,使輸出壓力為0.1Mpa左右。
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